glicoproteína está envolvido na regulação do peso corporal, através da inibição de enzimas no tecido adiposo lipogênicas

zinco está envolvido na regulação do peso corporal, através da inibição de enzimas no tecido adiposo lipogênicas

F Y Gong1, S J Zhang2, J Y Deng1, H J Zhu1, H PAN1, N S LI1 e Y F Shi1Received 13 de janeiro de 2009; Revisado 15 de junho de 2009; Aceito 15 de junho de 2009; Publicado on-line 21 de julho de 2009.

Topo da pageAbstractContext: Zinco (ZAG) foi encontrado para influenciar a lipólise no tecido adiposo e, recentemente, tem sido proposta como um factor candidato na regulação do peso corporal.

Objectivo

: Para elucidar a associação de nível ZAG soro com o peso corporal e percentual de gordura corporal em indivíduos normais, obesos e ratos obesos induzidos dieta rica em gordura (DFH).

Projeto

: A relação entre ZAG soro e parâmetros relacionados com a obesidade foi estudado em 44 indivíduos humanos e 36 ratos alimentados com comida padrão e HFD. Além disso, os efeitos da sobre-expressão ZAG em tecido adiposo de ratos também foi avaliada usando um método de transfecção de lipossomas.

Resultados

: nível ZAG Serum foi significativamente menor nos pacientes obesos e ratos obesos em comparação ao de pessoas e ratos com peso normal. A posterior análise estatística demonstrou que o nível ZAG foi negativamente correlacionada com o peso corporal (índice de massa corporal P r (r circunferência P cintura (r P circunferência do quadril (percentagem P r de gordura corporal (r P e massa gorda (r P em seres humanos após ajuste para idade e sexo. Além disso, ZAG superexpressão em camundongos reduziu o peso corporal eo percentual de gordura epididimal. a diminuição da FAS, ACC1 e mRNA DGAT eo aumento do mRNA HSL também foram observados no tecido adiposo epididimal em camundongos superexpressão ZAG.

Conclusão

: ZAG está intimamente ligada à obesidade. nível sérico ZAG é inversamente associado com o peso corporal e percentual de gordura corporal. A acção de ZAG está associada com enzimas lipogênicas regulada negativamente e upregulated expressões de enzimas lipolíticas no tecido adiposo de murganhos.

Palavras-chave: tecido adiposo zinco, ácido graxo sintase, hormona lipase sensível

Topo da pageIntroductionObesity tornou-se um problema de saúde global e que está estreitamente ligado a vários tipos de doenças como a diabetes, doenças cardiovasculares e câncer. No entanto, a patogénese da obesidade ainda permanece incerto. Mais análise de composição corporal revelaram que a perda de peso corporal pode ser atribuído exclusivamente à perda de Perda fat.8 corpo de tecido adiposo pode ser devido ao efeito lipolítico de ZAG porque incubação de ZAG em adipócitos isolados a partir de tecido adiposo murino foi demonstrado estimulará libertar glicerol em um manner.6 dependente da dose Curiosamente, estudos recentes realizados por Bing et al.9 e Bao et al.10 identificaram que ZAG não só é expressa em rato adulto tecido adiposo branco e tecido adiposo marrom (BAT), mas também pode ser segregada por adipócitos e SGBS rato 3T3 L1 humanos. Todas estas descobertas sugerem que talvez um novo ZAG adipocina produzida por adidas portugal loja adipócitos, e está associada com a perda de gordura corporal que podem estar envolvidos na acção estimuladora de ZAG na lipólise do tecido adiposo. No entanto, ainda não se sabe se ZAG tem ação estimulante semelhante na lipólise do tecido adiposo na obesidade e se tem qualquer influência na lipogênese do tecido adiposo.

Um certo número de genes envolvidos na acumulação de lípidos adipócitos, que incluem sintase dos ácidos gordos (FAS), acetil-CoA carboxilase (ACC), e acil-coenzima A: diacilglicerol-transferase (DGAT). FAS fornece substrato de ácido gordo não esterificado para a síntese de triglicéridos. ACC catalisa a carboxilação dependente de ATP da acetil-CoA para malonil-CoA formar, e de DGAT catalisa a adição do terceiro gordos acyle CoA para diacilglicerol porção. Tem sido relatado que a expressão aumentada do gene do FAS no tecido adiposo está ligada à acumulação de gordura visceral, sensibilidade insulina diminuída e aumento em jejum circulatório insulin.11 actividades FAS foram significativamente mais elevados em pacientes obesos e ratos geneticamente obesos do que em subjects.12 peso normal, 13 FAS actividades promotoras de genes foram 4-6 vezes superior em adipócitos de ratos obesos do que em pacientes não obesos de que sobre-expressam rats.14 de DGAT1 em tecido adiposo de ratinhos produziu obesity.15 no entanto, a hormona de lipase sensível (HSL) é uma enzima limitadora da velocidade na lipólise. A sua função fisiológica é para hidrolisar o triglicéridos armazenados no tecido adiposo em glicerol e ácidos gordos. Tem sido mostrado que a sobre-expressão de HSL tryglyceride impede a acumulação de triglicéridos em adipocytes.16 lipase e proteína HSL adiposo expressão é diminuída no estado de resistência à insulina obeso, 17 e o polimorfismo do promotor HSL C 60G está associada com o aumento da circunferência da cintura em indivíduos com peso normal. 18

A relação entre o nível de ZAG e perda de peso em caquexia e os poderosos lipídico mobilização efeitos da ZAG em conjunto com a função secretora do adipócitos nos levaram a perguntar se existe uma relação entre ZAG e ganho de peso na obesidade. Será ZAG tem qualquer efeito sobre a lipogênese além de sua função lipolítica? Neste estudo, nós investigamos a associação do nível ZAG soro com o peso corporal e percentual de gordura corporal em, indivíduos obesos normais e ratos obesos induzidos alto teor de gordura. Além disso, a expressão da FAS, ACC, DGAT e ARNm HSL também foram determinados por tempo real de fluorescência de PCR quantitativo em tecido adiposo epididimal de elevado teor de gordura induzida ratinhos obesos com ou sem gene ZAG transfectado para explorar os possíveis alvos envolvidos na acção de ZAG. Ambos os indivíduos com sobrepeso ou obesidade e voluntários normais tiveram testes normais de rotina de sangue e urina, hepática normal, a função renal e cardíaca, e sua pressão arterial sistólica (PAS) e pressão arterial diastólica (PAD) foram na faixa normal. Os pacientes com história de doença crónica, doenças endócrinas e qualquer outra doença, o que pode ter influenciado os resultados obtidos, foram excluídos. Todos os indivíduos foram seleccionados a partir de ambulatório de obesidade em College Hospital Peking Union Medical, e todos os sujeitos tinham antropométrico, clínico (pressão sistólica e diastólica, frequência cardíaca, eletrocardiograma, e assim por diante) e análises laboratoriais em jejum. peso, altura, índice de massa corporal (IMC), percentual de gordura corporal (massa gorda de gordura, massa livre de gordura (FFM) e água corporal total (TBW) de cada sujeito em roupas leves, sem meias e sapatos foram obtidos por analisador preços adidas outlet de impedância bioelétrica (TBF 215; Tanita, Akita, Japão). a circunferência da cintura foi medido com uma fita suave no pé sujeitos a meio caminho entre a última costela ea crista ilíaca a circunferência do quadril foi medida sobre a maior parte da região glútea e relação cintura quadril (. RCQ) foi consequentemente calculada. As amostras de sangue basal foram tomadas após um jejum. o colesterol total durante a noite, triglicéridos, lipoproteína de alta densidade (HDL), lipoproteínas de baixa densidade (LDL) de colesterol, glucose, creatinina, ácido úrico, AST, ALT, sangue inteiro rotina para WBC, RBC, HB, plaquetas e na urina de rotina foram medidos por métodos laboratoriais automatizados de rotina. nível ZAG sérico foi determinado por comercialmente disponível alfa2 de zinco humana glicoproteína kit ELISA (Biovendor Laboratorni Medicina, Modrice, República Checa), de acordo com as instruções dos fabricantes. O intra-ensaio e coeficiente de variação é de 1,7 e 7,3 respectivamente.

As características gerais dos dois grupos estão descritos na Tabela 1. O estudo foi aprovado pelo comitê de ética da College Hospital Peking Union Medical. Todos os participantes assinaram termo de consentimento antes de participar no estudo. Com a idade de 6 semanas, os ratinhos pesando 2527 foram divididas em quatro grupos distintos (n para cada grupo) e foram submetidas a diferentes dietas com a seguinte percentagem de energia: alimento padrão (SF): proteínas 24, gordura 11 e hidratos de carbono 65 e alto teor de gordura dieta (HFD): proteína 22 de gordura e carboidratos 55 23 o peso do alimento fornecido para cada rato foi monitorado todos os dias, eo peso corporal foi medido duas vezes por semana. Afirmamos que todos os regulamentos institucionais e governamentais aplicáveis ​​sobre o uso ético foram seguidos durante esta pesquisa. O segundo grupo de produtos de PCR e pcDNA3.1 (vector de ambos digeridos por EcoRV e HindIII foram ligados por ligase de ADN de T4 para produzir um plasmídeo pcDNA3.1 (expressão, em seguida, o plasmídeo foi sequenciado.

O plasmídeo construído acima foi digerido pelas enzimas de restrição EcoRV e HindIII. Como mostrado na Figura 1, os produtos digeridos prevendo apareceu. Outras experiências in vitro confirmou que ZAG ARNm e proteína pode ser expressa melhor em pré-adipócitos 3T3 L1 e meio de células seguintes transfecção de pcDNA3.1 (plasmídeo de expressão para estas células por tempo real quantitativa de RT PCR e Western blot (dados não mostrados). 1: DNA marcador DL2000 plus; 2: zinco murino (ZAG) sequências de ADNc de comprimento completo que codificam 924 3: pcDNA3.1 (digerido por EcoRV e HindIII; 4: pcDNA3.1 construído (plasmídeo de expressão; 5: pcDNA3.1 (digerido por EcoRV e HindIII; 6: ADN marcador DL15000.

figura completa e legenda (75K)

animais in vivo de DNA de plasmídeo de transfecção Após 5 semanas, os ratos obesos induzidos HFD foram divididos em três grupos distintos: o grupo HFD simples, grupo superexpressão ZAG (HFD e grupo plasmídeo de controlo negativo (HFD plasmídeo de transfecção foi realizada como anteriormente described.20 Pouco, plasmídeo de expressão ZAG (25 ou pcDNA3.1 (plasmídeo de controlo negativo (25 em 150 meio OPTI MEM (um tipo de meio isento de soro, muitas vezes utilizados em transfecção, a partir de Invitrogen, Carlsbad, CA, EUA), foi cuidadosamente misturada com lipofactamine 2000 ( 40 em 150 meio OPTI MEM, e a mistura total 300 foi incubada à temperatura ambiente durante 30 então injectada em ratinhos pela veia da cauda. os ratos no grupo DH simples foram submetidos ao mesmo volume de injecção de meio OPTI MAM como o de controlo. Esta injecção foi realizada em 0900 horas uma vez em cada 2 dias por sete vezes. Após 2 semanas, os ratos foram mortos a seguir em jejum durante a noite. as amostras de sangue foram obtidos para compostos bioquímicos e ensaios de ZAG, e tecido adiposo a partir de epididimal foram dissecados, pesados, em seguida, imediatamente congelado em azoto líquido até análise posterior FAS e HSL ARNm. A percentagem de gordura epididimal (gordura epididimal de ratos foi calculada pelo peso do corpo de ratos divididos em massa de gordura epididimal.

Western blotting

para ensaios de nível ZAG soro em ratinhos análise de Western blot foi realizada tal como anteriormente described.21 Em resumo, a concentração de proteína de soro de murino foi determinada utilizando o kit de reagente de ensaio de proteína BCA (Pierce, Rockford, IL, EUA). As amostras contendo 10 de proteína foram separados por electroforese em 12 géis de SDS. A proteína foi então transferida para uma membrana de nitrocelulose (Immobilon P; Millipore, Billerica, MA, EUA) e a imunodetecção foi realizada utilizando um anticorpo monoclonal de ratinho (ZAG ​​(IE2), SC 21720; Santa Cruz Biotechnology, Santa Cruz, Califórnia, EUA) a 4 durante a noite a uma diluição de 1: 1000. As manchas foram então incubadas com um anticorpo secundário de cabra anti-rato conjugado com peroxidase de rábano (Santa Cruz Biotechnology) numa diluição de 1: 2000. Os sinais foram detectados por reagentes de luminol de Western blotting (Santa Cruz Biotechnology). Um processo semelhante foi também utilizado para ensaio de soro em ratos, tal como uma referência interna. A intensidade de sinal de bandas foi analisada utilizando o software Bandscan, e as intensidades de cada banda ZAG foram normalizados para as bandas correspondentes.

fluorescência em tempo real A análise de PCR quantitativo para a expressão de enzimas metabólicas gordos em tecido adiposo ratinhos O ​​processo de extracção de RNA total a partir de ratinhos epididimal tecido adiposo e a transcrição reversa foram o mesmo como descrito acima para a construção de pcDNA3.1 (plasmídeo de expressão. SYBR Green PCR mistura de PCR (Applied Biosystems, Reino Unido) e ABI 7500 instrumento de PCR (Applied Biosystems, USA) foram usadas para verdadeiro processo de fluorescência quantitativa PCR em tempo. As sequências dos iniciadores para a amplificação por PCR foi mostrado na Tabela 1. O volume total de reacção de cada cavidade é de 20 em placa de 96 poços, e cada gene foi repetida em triplicado. a amplificação procedeu-se de acordo com o protocolo termociclador padrão, e a curva de dissociação de todos os genes demonstraram a amplificação específica. o valor médio de Ct para foi usado cada amostra para análise de dados. Todas as amostras eram normalizados para os valores de 18 anos e os resultados expressos como alterações de dobragem de Ct valor em relação ao controlo, utilizando o 2 formula.22

analysisData estatística são mostrados como média Antes de análise estatística, os parâmetros nonnormally distribuídos foram transformados logaritmicamente para uma distribuição normal. Diferenças entre os grupos foram analisados ​​por ANOVA de uma via. Pearson e coeficientes de correlação parciais foram utilizados para determinar associação linear entre ZAG soro e outras variáveis ​​de parâmetros relacionados com a obesidade em humanos e camundongos. Todos os cálculos estatísticos foram executados em SPSS 12.0 para Windows (SPSS Inc., Chicago, IL, EUA), e P foi considerada estatisticamente significativa.

Top de nível pageResultsZAG e outras características em diferenças normais e com sobrepeso ou obesos subjectsThe de medidas antropométricas e laboratoriais em indivíduos normais e com sobrepeso ou obesos são apresentados na Tabela 2. Como esperado, o grupo com sobrepeso ou obesos apresentaram maior peso (P IMC (cintura P circunferência (P circunferência do quadril (P WHR, (percentagem P de gordura corporal (massa gorda P gordura (P do que o grupo normal. no entanto, adidas portugal não houve diferença significativa entre os dois grupos em relação a PAS, PAD, glicemia de jejum e perfil lipídico. Nossa preexperiment anterior encontrada principalmente nesse nível ZAG soro em pacientes obesos foi muito mais baixa do que em pessoas com peso normal pelo método western blot (dados não mostrados). não há correlação entre ZAG e glicemia de jejum, colesterol total, triglicérides, colesterol HDL, colesterol LDL em sujeitos humanos.